在各种致病因素作用下，大脑实质受到损伤后可出现神经功能改变，如偏瘫、平衡失调等。
对于神经系统疾病动物模型而言，造模结束只是步，验证个体模型是否成功是第二步，而控制组内个体特征一致性是第三步。
采用神经功能评分是重要的观察指标，可以用来在体评价模型是否成功或者病变严重程度。尽量控制动物模型的评分一致性是很困难但不得不做的一件事。
这里介绍三种常见的啮齿类神经功能评分方法。
一、【Longa评分法】
① 无神经功能缺陷：0分；
②瘫痪侧前爪不能完全伸展：1分；
③行走时向瘫痪侧转圈：2分；
④行走时向瘫痪侧倾倒：3分；
⑤不能自动行走，存在意识丧失现象：4分。
二、【Bederson评分法】
抓起动物的尾巴，使动物离台面10cm高。此时，正常大鼠的前爪处于伸直状态，而存在神经功能病变的动物则可出现如下表现：
① 无神经功能缺陷：0分；
②动物尾巴提起后，瘫痪侧前肢回收并屈于腹下，而正常侧肢体伸向台面：1分；
③除第二条表现以外，俯卧于台面时向瘫痪侧侧推动物的阻力较正常侧明显降低：2分；
④除条和第二条以外，动物行走时向瘫痪侧旋转：3分。
三、【平衡木评分法】
一根长为80cm、宽为2.5cm的木条，水平固定在离台面10cm高度的地方，然后让动物在木条上行走。
①能跳上平衡木条，可以自由行走但不跌倒：0分；
②能跳上平衡木条，动物在上面行走会跌下，但跌下的机会小于50%：1分；
③能跳上平衡木条，动物在上面行走会跌下，但跌下的机会大于50%：2分；
④动物在正常侧身体的帮助下可以跳上平衡木条；但是瘫痪侧的后肢不能够帮助身体向前移动：3分；
⑤动物无法在平衡木条上行走，但是可以坐在木条上：4分；
⑥将动物放在木条上，动物很快会掉落下来：5分。
6． 八臂迷宫实验方法根据实验目的的不同迷宫臂的数目可不同，包括8、16、24、32、40和48臂迷宫。迷宫臂越少要求动物记住探究过的臂也越小，动物的行为操作就越简单。增加臂的数目一方面增加了对动物空间记忆的要求，另一方面也引入了更多的、有必要考虑的干扰因素（例如过去的迷宫学习对目前所测记忆的影响）。所以，通常使用8臂迷宫，既可减少不必要的、过多臂的干扰，又可缩短训练和测试所花的时间。
7． 所用食物通常为小块的、带巧克力味（动物喜欢的味道之一）或甜味的早餐圈（每块10mg）；也可用液体食物（如巧克力奶或水）。后者对于测试某些影响动物对固体食物吞咽的尤为实用。
8． 影响动物迷宫操作主要有两大因素：对迷宫或观察者的恐惧与动物探究习性和已知放在迷宫臂内食物的驱使。恐惧因素过强会阻止动物的迷宫操作，使动物始终停留在迷宫的某一个地方而不去探究。缺乏对食物的渴求也会产生类似结果，增加对动物的抚摸，必要时加高迷宫臂的侧墙，有助于减少动物的恐惧。如食物的驱使作用不足，可减少食物量，但必须同时监测体重和一般身体状况。通常大鼠体重不应低于禁食前的80%；对多数大鼠，体重降低15%即可。
9． 与水迷宫不同，臂迷宫适合反复测试或长期记忆的测试。一般认为，工作记忆代表短期记忆，参考记忆代表长期记忆。
注意事项
1. 针头大小与动物的种类有关，t 同时针头一定要磨钝。
2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞。
3. 经腹腔暴腔，先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织。
4. 将针头经左心室插入升主动脉（颜色变白的哦），并用钳子固定。
5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要随便揭开心脏的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其。
6. 将 4 度的生理盐水（好已动物的发白为标准，我们实验室的大鼠约用 250ml）和多聚甲醛 (根据所取得材料而定) 依次灌入。
7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。
一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)（Solarbio，G0170）
DMEM（Hyclone，SH30023）
FBS（Hyclone，SH30070.03）
青链mei素（Hyclone，SV30010）
胰酶（Hyclone，SH30042.01）
PBS（南京生兴，SN331）
CO2培养箱（Thermo fisher，3131）
Confocal荧光显微镜（Zeiss，LSM710）
二、实验方案
1、MG63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的DMEM完全培养基中培养，培养在37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养，当细胞增殖至80%-90%时，用胰酶将细胞消化下来，按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入miR-22、cisp1atin、cisp1atin和miR-22后，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。4、加入适量MDC Stain，轻轻混匀。5、室温避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。7、加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。
以上信息由专业从事动物模型购买的英瀚斯于2024/3/27 9:04:11发布
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